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在用紫外可見分光光度計儀器做定量分析時，通常液層厚度是相同的，按照比爾定律，濃度與吸光度之間的關系應該是一條通過直角坐標原點的直線。但在實際工作中，往往會偏離線性而發生彎曲，若在彎曲部分進行定量，將產生較大的測定誤差。導致偏離線性的主要原因有化學因素和光學因素兩方面。

1. 化學因素

 比爾定律只有在描述稀溶液對單色光的吸收時才是成功的。在較高濃度（通常大于0.01mol/L)時將引起偏差。一方面是由于濃度較大時，溶液中的吸光粒子距離減少，以致每個粒子都可影響其臨近粒子的電荷分布。這種相互作用使他們吸收給定波長輻射的能力即吸光系數發生改變，從而使吸光度和濃度間的線性關系發生偏離。另一方面，濃度較大時，由于溶液對光折射率的顯著改變而使觀測到的吸光度發生較顯著的變化，從而導致對比爾定律的偏離。因此測定時宜在較稀的溶液（一般小于0.01mol/L）中進行。

此外，吸光物質可因濃度或其他因素改變而有離解、締合或溶劑的相互作用，而發生明顯偏離比爾定律的現象。為了避免這類誤差，應嚴格控制溶液條件，使被測物保持在吸光系數相同的形式，以獲得較好的分析結果。

2.光學因素

非單色光的影響   比爾定律只適用于單色光，但一般的分光器所提供的入射光并不是純的單色光，而是波長范圍較窄的復色光。由于同一物質對不同波長光的吸收程度不同，因而導致對比爾定律的偏離。

為了避免非單色光造成的誤差，測定時應選用較純的單色光（即波長范圍盡可能窄的復合光）。隨著儀器制造工藝的提高和保養方法的改善，雜散光的影響可減少到忽略不計。

其他光學因素的影響  首先，光通過吸收池時，約有1/10或更多的光能因反射而損失。在一般情況下，可用參比溶液對比來補償。即先讓入射光通過參比溶液（除不含被測組分外其他成分與被測液相同）的吸收池，調節儀器的透光率為100%，然后再用于測被測液的透光率或吸光度。其次，溶液中的質點對入射光的散射作用，可使透過光減弱。對于真溶液，由于質點小，散射作用不強，同時因有空白對比，一般不影響吸光度測量。單溶液如含膠體、蛋白質等大的質點，則散射作用增強，而且不易制備參比液加以補償，因而常使測得的吸光度偏高，故應盡量避免。   另外，在實際測定中，由于儀器性能限制，通過吸收池的光不是真正的平行光，而是稍有傾斜的光束，這將使通過吸收池的實際光程L增加而影響A的測量值。這是同一物質溶液用不同儀器測定吸光度值產生差異的原因之一。